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Agilent液相色譜儀標(biāo)準(zhǔn)操作程序
更新時(shí)間:2019-08-27   點(diǎn)擊次數(shù):1855次

Agilent液相色譜儀標(biāo)準(zhǔn)操作程序 

1.目的:建立一個(gè)液相色譜的標(biāo)準(zhǔn)操作程序。

2.范圍:適用于Agilent液相的使用。

3.責(zé)任:使用Agilent液相的化驗(yàn)員。

4.程序

4.1工作環(huán)境 
實(shí)驗(yàn)室溫度為20~27℃,溫度變化<3℃/hr,相對(duì)濕度<80%,液相色譜儀工作臺(tái),長(zhǎng)2米、寬0.8米、承重大于80公斤,離墻距離0.3米以上。單相交流220V,(+5%~10%),50~60Hz,有單的良好接地。配置穩(wěn)壓電源,功率大于2.5千瓦。

4.2使用前的準(zhǔn)備 
4.2.1二次蒸餾水,(建議用0.45微米水相濾膜過(guò)濾);甲醇或乙晴(色譜純),(建議用0.45微米有機(jī)相濾膜過(guò)濾);其他樣品所需流動(dòng)相,(都需經(jīng)過(guò)0.45微米濾膜過(guò)濾)。將上述溶劑放入超聲波池,除去氣泡,方可使用。 
4.2.2把流動(dòng)相放入溶劑瓶中,打開purge閥,單擊pump圖標(biāo),出現(xiàn)參數(shù)設(shè)定菜單,單擊setup選項(xiàng),進(jìn)入pump編輯畫面,設(shè)flow:5ml/min,單擊OK;單擊pump圖標(biāo),出現(xiàn)參數(shù)設(shè)定菜單,單擊pump control選項(xiàng),選中ON,單擊OK,則系統(tǒng)開始purge,直到管線內(nèi)(由溶劑瓶到泵入口)無(wú)氣泡為止,切換通道繼續(xù)purge,直到所有要用通道無(wú)氣泡為止;單擊pump圖標(biāo),出現(xiàn)參數(shù)設(shè)定菜單,單擊setup選項(xiàng),進(jìn)入pump編輯畫面,設(shè)flow:1.0ml/min,關(guān)閉purge valve。單擊pump下的的瓶圖標(biāo),輸入溶劑的實(shí)際體積和瓶體積,也可輸入阻止分析和關(guān)泵的體積,單擊OK。

4.2.3進(jìn)行樣品前處理(稀釋或溶解至所需濃度)。

4.3Agilent液相色譜儀實(shí)驗(yàn)步驟

4.3.1準(zhǔn)備 
4.3.1.1開啟Agilent 1100LC各模塊電源。

4.3.1.2打開計(jì)算機(jī),雙擊online圖標(biāo)。 
4.3.1.3從"view"菜單中選擇"method and run control"畫面,單擊"view"菜單中的"show top toolbar","show status toolbar","system diagram","sampling diagram"使其命令前有"√"標(biāo)志。

4.3.2數(shù)據(jù)采集方法編輯

4.3.2.1從“method"菜單中選擇"edit entire method"項(xiàng),選中除"data analysis"外的三項(xiàng),單擊OK,進(jìn)入下一畫面。 
4.3.2.2在"method comments"中加入方法的信息(如This is for test!),單擊OK進(jìn)入下一畫面。

Agilent液相色譜儀

4.3.2.3泵參數(shù)設(shè)定 
在"flow"處輸入流量1ml/min,在"solvent"處輸入流動(dòng)相中各溶劑所占的比例,也可"insert"一行"timetable",編輯梯度。在"pressure limits max"處輸入柱子的zui大耐高壓,以保護(hù)柱子,單擊OK進(jìn)入下一畫面。

4.3.2.4柱溫箱參數(shù)設(shè)定 
在"temperature"下面的方框內(nèi)輸入所需的溫度,并選中它點(diǎn)擊"more>>"鍵,如圖所示,選中"same as left"使柱溫箱的溫度左右一致,點(diǎn)擊OK進(jìn)入下一畫面。

4.3.2.5 VWD檢測(cè)器參數(shù)設(shè)定 
在"wavelength"下方的空白處輸入所需的檢測(cè)波長(zhǎng),在"peak width(response time)"下方點(diǎn)擊下拉式三角框,選擇合適的響應(yīng)時(shí)間,如>0.1min 。 在"timetable"中可以"insert"一行,可以輸入隨時(shí)間切換的波長(zhǎng)。

Agilent液相色譜儀

4.3.2.6在"run time checklist"中,選中"data acquisition",單擊OK。

4.3.2.7單擊“method"菜單,選中"save method as",輸入一方法名,單擊OK。

4.3.2.8從"run control"菜單中選擇"sample info"選項(xiàng),輸入操作者姓名,在"data file"中選擇"manual"或"prefix"。 
4.3.2.9從"instrument"菜單中,選擇"system on"。 
4.3.2.10單擊OK,等儀器ready,基線平穩(wěn),從"method"菜單中選擇"run method",進(jìn)樣。 
4.3.2.11進(jìn)樣時(shí),閥門位置處于"inject"位置,進(jìn)樣針取樣量應(yīng)為所規(guī)定體積的三倍,用濾紙拭凈針頭表面殘留液,進(jìn)樣時(shí)要輕而快,進(jìn)樣完畢應(yīng)快速將閥門搬至"load"位置,進(jìn)樣完畢,數(shù)分鐘后將進(jìn)樣針拔下,閥門回復(fù)到"inject"位置。 4.3.3數(shù)據(jù)分析方法編輯

4.3.3.1從"view"菜單中,單擊"data analysis"進(jìn)入數(shù)據(jù)分析畫面。

4.3.3.2從"file"菜單中選擇"load signal"選項(xiàng),選中您的數(shù)據(jù)文件,單擊OK。

4.3.3.3做譜圖優(yōu)化,從"graphics"菜單中選擇"signal options"選項(xiàng),從"ranges"中選擇"auto scale"及合適的顯示時(shí)間,單擊OK,或選擇"use ranges"調(diào)整。反復(fù)進(jìn)行,直到圖的比例合適為止。

4.3.3.4積分 
4.3.3.4.1從"integration"中選擇"auto integrate",如積分結(jié)果不理想,再?gòu)牟藛沃羞x擇"integration events"選項(xiàng),選擇合適的"slope sensitivity","peak width","area reject","height reject"。 
4.3.3.4.2從"integration"菜單中選擇"integrate"選項(xiàng),則數(shù)據(jù)被積分。

4.3.3.4.3如積分結(jié)果不理想,則重復(fù)上兩步動(dòng)作,直到滿意為止。

4.3.3.4.4單擊左邊"√"圖標(biāo),將積分參數(shù)存入方法。

4.3.3.5打印報(bào)告 
4.3.3.5.1從"report"菜單中選擇"specify report"選項(xiàng),進(jìn)入。 
4.3.3.5.2單擊"quantitative results"框中"calculate"右側(cè)的黑三角,選擇所需的報(bào)告形式,其他選項(xiàng)不變,單擊OK。 
4.3.3.5.3從"report"菜單中選擇"print report",則報(bào)告結(jié)果將打印到屏幕上,如想輸出到打印機(jī)上,則單擊"report"底部的"print"鈕。

4.3.4Agilent液相色譜儀關(guān)機(jī) 
4.3.4.1關(guān)機(jī)前,先用水和有機(jī)溶劑對(duì)系統(tǒng)進(jìn)行梯度沖洗,然后再用有機(jī)溶劑沖洗系統(tǒng),然后關(guān)泵(適用于反相色譜柱)。[正相色譜柱用適當(dāng)?shù)娜軇_洗]

4.3.4.2退出化學(xué)工作站,及其他窗口。 
4.3.4.3關(guān)掉Agilent1100電源開關(guān),計(jì)算機(jī)(用shut down關(guān))。 
4.4.1色譜柱長(zhǎng)時(shí)間不用,存放時(shí),柱內(nèi)應(yīng)充滿溶劑,兩端封死。 
4.4.2對(duì)于手動(dòng)進(jìn)樣器,當(dāng)使用緩沖液時(shí),要用水沖洗進(jìn)樣口,同時(shí)搬動(dòng)進(jìn)樣閥數(shù)次。

4.4.3流動(dòng)相使用前必須過(guò)濾、超聲,不能使用多日存放的純化水(易長(zhǎng)菌),應(yīng)每天更換純化水。

Agilent液相色譜儀

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